安捷伦Seahorse XF实验检测液解决方案

首页    安捷伦Seahorse XF实验检测液解决方案

安捷伦Seahorse细胞能量代谢分析系统采用独特的XF技术实时、同时测量活细胞内两条主要的能量代谢途径——线粒体呼吸和糖酵解,极大地简化了细胞能量代谢过程。安捷伦Seahorse XF培养基专用于XF分析,推荐研究者使用,以获得最佳实验结果。

pH 7.4 XF DMEMRPMI培养基制备安捷伦Seahorse XF实验用培养基的最佳实践方案:

1. 在使用当天将足量pH 7.4XF DMEMRPMI培养基转移至一个新的无菌瓶中。

注:如果当天实验只需少量培养基,建议不要预热整瓶,且每次使用过后拧紧瓶盖以保持pH值不变;

2. 加入适量XF补充剂/底物;

:必须在推荐的浓度范围内使用XF补充剂,以确保分析培养基具有准确的最终pH值。如果使用其他供应商提供的其他品牌的补充剂,则无法保证培养基具有准确的 pH值。推荐的补充剂浓度为葡萄糖0-10 mmol/L、丙酮酸盐0-1 mmol/L、谷氨酰胺0-2 mmol/L。特定补充剂浓度取决于不同实验需求。参见XF分析培养基的制备流程XF分析试剂盒用户指南了解详细信息。如果培养基和所有补充剂的无菌状态未受到破坏,则不需要对最终分析培养基进行过滤除菌。

3. 将培养基预热到37 ºC,分析培养基即可用于分析(无需调节 pH)。

用需要调节 pH 的培养基制备安捷伦 Seahorse XF 分析培养基的最佳实践方案:

1. 在使用当天将足量 XF 培养基转移至一个新瓶中;

2. 加入适量补充剂/底物;

:制备用于糖酵解速率测定的分析培养基时,需要在DMEM培养基和RPMI培养基中分别加入5 mmol/L1 mmol/L HEPES 缓冲液。而对其他XF分析的培养基,可以不加 HEPES。

3. 将培养基预热到 37 ºC

4. pH调至7.4 ± 0.1

5. 调节pH值后对培养基进行过滤灭菌,分析培养基即可用于分析。

常见问题:

1.Seahorse XF检测液中需要加入抗生素吗?

无需加入抗生素,因为大部分XF实验在几小时内就结束了。

2.可以在Seahorse检测液中加入血清吗?

不建议加入血清(如:FBS),因为其会影响检测液的缓冲能力,并可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果。另外,使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药孔中进行注射时,会出现注射失败的情况。

3.加入底物的检测液在多长时间内可保持稳定?或可以提前配好检测液吗?

Seahorse检测液在实验当天现用现配。

4.为何使用自购的glucose、pyruvateglutamineSeahorse XF base medium 配制检测液时,调节pH时要加很多NaOH,且pH变化非常慢?

可能是由于glucose、pyruvateglutamine 中存在一些杂质,比如缓冲成分,导致加入NaOHpH变化较慢。

5.为何不能使用XF base medium配制的检测液进行Glycolytic ratereal-time ATP rate两个实验?

XF base medium中含有酚红,该物质会影响这两个实验的测量。

6.为何不能使用GlutaMAX来代替Glutamine呢?

不建议使用GlutaMAX来配制检测液。因加入GlutaMAX后,还需细胞进一步将其转化为Glutamine,这可能会影响线粒体对Glutamine氧化的动力学过程。

7.检测液的pHXF实验非常重要吗?

是的,Seahorse XF实验通过测定细胞代谢物(如:氧和质子)的变化来确定OCR ECAR,而检测液pH会影响这些代谢物的产生或消耗,因此保持检测液一致的 pH37℃,pH=7.4)非常重要。

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

版权说明:版权归原作者及安捷伦细胞团队,本文内容部分来源于美国安捷伦科技公司官网(www.agilent.com)。如有问题请联系小编,欢迎批评指正,衷心感谢!

了解更多信息,请联系路易企业西南区业务联系电话:028-86625230、028-86625235Agilent 技术热线:800-820-3278 、400-820-3278(手机)。

2021年3月29日 11:23
浏览量:0