实现前所未有的代谢分析-安捷伦Seahorse XF HS迷你板

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安捷伦Seahorse XF技术可提供比任何其他技术更高的细胞耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)测量灵敏度。这一灵敏度得益于仪器在测量过程中形成的瞬态微室。在进行测量时,仪器将内置有氧气和pH传感器的探针板降低至细胞培养板的分析孔中。传感器距离孔底200µm,形成体积为几微升的密闭瞬态微室。随着氧气和pH水平的变化,这些分析物的细胞外代谢流由传感器检测并由仪器读取。测量时间通常为3分钟,并实时计算速率。测量期结束后,升高探针,使细胞外培养基恢复到基础条件。由于微室的体积较小,粘附于孔底的细胞所产生的氧气水平和细胞外pH值的变化与在整个孔体积内进行测量时相比被放大,从而能够便捷、可靠地对目标细胞类型进行代谢分析。

安捷伦Seahorse XF HS迷你板的孔底部具有模压环形结构。这种结构与硅胶罩结合使用,可将细胞集中到较小的区域并形成微室,从而将测量体积缩小为标准XFp细胞培养迷你板的1/3。当使用相同数量的细胞时,这种体积的缩小将使测量信号增强为原来的三倍,因此可以将测量所需的细胞数量减少为原来的1/3。

 

不同微室类型的放大图像:(A)标准安捷伦Seahorse XFp迷你板微室 (2.28 µL)、(B)安捷伦Seahorse XF HS 迷你板微室(0.76 µL)。

Seahorse XF HS Mini分析仪上运行安捷伦Seahorse XF细胞线粒体压力测试试剂盒,其中THP-1 细胞以12000个细胞/孔的密度接种到安捷伦XFp迷你板和XF HS迷你板上。数据比较了使用两种孔板类型检测到的信号水平(耗氧量和pH),随后将信号水平数据转换为代谢率。灰色区域表示基础范围,不属于推荐的代谢速率范围。使用XF HS迷你板时,耗氧量和H+释放水平增至XFp迷你板的三倍。

安捷伦Seahorse XF HS迷你板信号增加

注意:与XFp迷你板相比,XF HS迷你板更小的微室体积在相同细胞数量下可提供更高的细胞外酸化率 (ECAR)值。这是因为ECAR值描述的是单位时间内的pH值变化,没有考虑测量体积,因此当微室体积减小时,ECAR会成比例增加。相比之下,质子释放率 (PER) 值以浓度单位(pmol H+/min) 提供,因此以类似于OCR测量的方式考虑了样品体积。

XF HS迷你板是一种经过验证的细胞培养平台,能够以更少的细胞用量或对低代谢率细胞进行代谢测量。它还通过减少涉及的动物数量、分离或纯化细胞之前使用的细胞瓶的数量进而减轻了XF之前的实验负担。结合使用安捷伦Seahorse XF HS Mini分析仪和安捷伦Seahorse XF HS迷你板,能够在极具挑战性和复杂性的生物模型中采集高灵敏度且准确的代谢率数据,而这些模型过往往往难以实现这种有价值的代谢分析。

安捷伦Seahorse XF细胞线粒体压力测试中的初始CD4+T细胞(如图所示,接种密度为200000个细胞/孔或70000个细胞/孔)接种于XFp PDL迷你板(货号 103722-100)XF HS PDL 迷你板(货号103727-100)中,使用补充10 mmol/L葡萄糖、2 mmol/L谷氨酰胺和1 mmol/L 丙酮酸钠的安捷伦Seahorse RPMI培养基(pH 7.4)。所有实验中使用的FCCP浓度均为1.5µmol/L。归一化数据表示三个孔板的平均值±SEM。

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

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2021年5月13日 09:39
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