测定细胞代谢潜能的唯一方法 ——安捷伦Seahorse XF细胞能量代谢表型测试试剂盒

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安捷伦Seahorse XF细胞能量代谢表型测试试剂盒提供确定细胞能量代谢基础表型、应激表型和代谢潜能的标准方法,是一款简单易用的分析试剂盒,能够同时测量活细胞中线粒体呼吸和糖酵解两个主要细胞产能途径,可快速测定细胞的能量代谢表型并研究代谢转换。该试剂盒也可用于筛查能够潜在调节线粒体或糖酵解功能的化合物。

实验背景:

相关基因和蛋白质表达水平的变化常被作为细胞代谢变化的标志。然而,代谢变化的生理学效应需要对活细胞进行功能分析来证实。由于细胞通过综合线粒体呼吸和糖酵解来满足能量和生物合成的需求,对这两条代谢通路间平衡的测量和评估将能够提供任何单一指标都无法提供的信息。通过同时测定细胞在基础和应急状态下对这两条主要能量通路的相对利用率,可快速得知基因变化导致的功能效应。

实验原理:

Seahorse XF细胞能量表型测试通过一次性注射OligomycinFCCP这两种通路调节因子,同时测量线粒体呼吸和糖酵解潜能。

Oligomycin:ATP合酶的抑制剂可抑制线粒体ATP产生,从而将能量产生转移至糖酵解通路,引起ECAR进一步升高,反映了细胞最大的糖酵解能力;

FCCP:是一种解偶联剂,加入该药会破坏质子梯度和线粒体膜电位,通过ETC的电子流不受限制,复合物IV耗氧量达到大,从而获得线粒体有氧呼吸最大值。

实验优势:

该实验通过一次通路调节因子加药,即可同时测量线粒体呼吸和糖酵解潜能。快速测定细胞能量代谢表型,揭示其代谢潜能,提供细胞能量代谢的概况,为活细胞能量代谢表型的测定提供了一种简单的检测方法。该方法是筛选线粒体、糖酵解功能调控药物的一种有效方法。

巨噬细胞被细菌LPS(脂多糖)等抗原激活

A) RAW 264.7巨噬细胞系暴露于LPS1小时导致基础活动轻度增加(空心符号),而在线粒体刺激因子的作用下对两条通路的利用率大幅增加(实心符号)。B)如对照(蓝色)LPS处理(红色)的应激耗氧率差异所示,用抗原启动巨噬细胞会增强它们的好氧潜能。

文献应用:

1、Nuclear respiratory factor-1 and bioenergetics in tamoxifen-resistant breast cancer cells

Effects of E2 and 4-OHT on ECAR in TAM-sensitive versus TAM-resistant breast cancer cells

2、Cellular Metabolism Is a Major Determinant of HIV-1 Reservoir Seeding in CD4+ T Cells and Offers an Opportunity to Tackle Infection

HIV-1-Infected CD4+ T Cells Are Characterized by Higher Metabolic Activity Levels

3、Bioenergetic Adaptations in Chemoresistant Ovarian Cancer Cells

Bioenergetics organization of chemosensitive and chemoresistant ovarian cancer cells

4、Entry of glucose- and glutamine-derived carbons into the citric acid cycle supports early steps of HIV-1 infection in CD4 T cells

Enhanced respiratory capacity is associated with increased levels of HIV-1 infection

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

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2020年7月16日 11:17
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